(1)灵芝培养基的制备与菌种的分离

①母种培养基配方及制备

母种培养基 多采用马铃薯一琼脂(PDA)培养基，其配方：马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素B11～2片，水l000毫升。

制备方法 按常规方法进行。培养基制成后，调节pH值4～6，分装试管，高压灭菌30分钟，稍冷却后摆成斜面培养基。

②灵芝纯菌种的分离 常用有组织分离法和孢子分离法两种。

组织分离法 在无菌的条件下，选取新鲜、成熟的灵芝，于菌盖或菌柄内部切取一小块黄豆大小的组织块，接种在斜面培养基上。置温度24～26℃下培养7～10天;当白色菌丝布满斜面时，即得母种，然后再扩大培养成原种和栽培种。

孢子分离法 在无菌的条件下，取新鲜成熟的灵芝菌，于马铃薯培养基上培养一段时间，温度控制在24～26℃左右，培养基表面上便形成与子实体(小灵芝)相似物，在贴近管壁处形成菌管，自菌管管口中散发出孢子粉，便是纯孢子粉，将此孢子粉接种到培养基上获得一层薄薄的菌苔状的营养菌丝，即得灵芝纯菌种。

(2)人工栽培方法 目前多采用瓶栽和段木培养两种方法。

①灵芝瓶栽法

培养料配方 棉子壳80%，麸皮16%，蔗糖1%，生石膏3%。加水适量，混拌均匀，使培养料含水量在60%～70%左右，以手握之不出水为度，调节pH值5～6。

装瓶灭菌 料拌均匀后，先闷l小时，然后装入广口瓶中，装料要上紧下松，装量距瓶口3～5厘米即可。装好后用尖圆木棒打一通气孔，擦净瓶体，用塑料薄膜加牛皮纸扎紧瓶口，然后进行灭菌(高压灭菌，压力1.1千克/每平方厘米，时间1.5小时;常压灭菌100℃，保持8～10小时，再闷12小时)。

接种 在无菌室内进行。用75%的酒精消毒接种工具，然后用右手拿接种耙在酒精灯火焰上灭菌，左手拿菌种瓶，并打开菌种瓶口，在火焰旁用接种耙取出一块小枣大小的菌种，迅速放人栽培料瓶中，经火焰烧口，用牛皮纸包扎好，置于培养室内培养。

培养与管理 在温度20～26℃，空气相对湿度在60%以下，约培养20～30天，菌丝即可长满全瓶;再继续培养，培养料上就会长出l厘米大小的白色疙瘩或突起物，即为子实体原基??芝蕾。当芝蕾长到接近瓶塞时，拔掉瓶口棉塞，让其向瓶外生长，这时，控制室温在26～28℃，空气相对湿度在90%～95%，保持空气新鲜，给以散射光等条件，突起物芝蕾向上伸长成菌柄，菌柄上再长出菌盖，孢子可从菌盖中散发出来。从接种到长出菌盖，约需2个月时间。生长期要注意管理，每天要通过定时开窗的办法换气，如在气温偏高时，上、下午都要开窗。

②灵芝段木培养法

段木的选择 应选用栎、栗、柞、桃、柳、杨、刺槐等阔叶树作段木。直径5～15厘米均可选用。锯成l米长的段木，不要削皮，码堆干燥。

接种 选择培养20天左右子实体原基刚形成的新鲜菌种。这种菌种生命力强，接入段木后发育快，且不怕杂菌污染。接种工具可用直径1～1.2厘米的打孔器或电钻头。打入段约l厘米深，行株距20厘米×20厘米，呈品字形排列。打孔后立即接种。接种前先将菌种取出，截成l平方厘米的水块，轻轻塞入孔穴中，稍压紧后盖上树皮。30天后，菌丝便浸入段木，并可见孔穴四周形成棕色菌圈，说明接种成功。立即将段木埋入pH值5～6的酸性土壤中，若天气干旱，可淋水湿润土壤。遇雨季或雨天，要注意排水。此外，还要在栽培场周围撒一圈拌有灭蚁灵的毒土，诱杀白蚁，防止危害段木。第二年清明节后，当气温升至25℃左右，可取出数根段木检查：揭开树皮盖，见孔穴周围已长成茶褐色，或已长出芝蕾;段木两端有白色菌丝或浅褐色菌膜，并可嗅到灵芝菌丝的特殊气味，显示菌丝已成熟。立即将段木挖出，截成长17～22厘米的小段木，然后，将其斜埋入酸性含砂砾的土壤中，上端露出地面约3厘米，且覆盖杂草遮荫，隔数日洒一次水，保持土壤湿润，经7～l0天开始长出芝蕾。在生长芝蕾期，栽培场要保持90%的相对湿度，约2个月左右芝蕾长成灵芝成品，即可采收。